sgdd.net
当前位置:首页 >> 退火温度和tm值 >>

退火温度和tm值

1.一般来说,较低的退火温度可以提高pcr反应的敏感性但特异性较差;而较高的退火温度则可以提高pcr的特异性但却降低了扩增效率.通常引物与模板的退火温度在45-55度.2.优化退火温度最好的方法是设置一系列对照反应,即通过在低于计算出的引物Tm值2-10度的温度范围内,进行退火的一系列平行反应来确定最佳退火温度.也可以通过touch down pcr来设定退火温度,得到最佳退火温度.

退火温度与引物的TM值的关系主要和DNA聚合酶与其buffer有关.有些退火温度要比TM低5度、3度,有些还会高3度,有些是一模一样的.主要参考不同公司所生产的DNA聚合酶的说明书.

引物的复性温度可通过以下公式帮助选择合适的温度:Tm值(解链温度)4(G+C)+2(A+T)复性温度Tm值(5~10℃)在Tm值允许范围内,选择较高的复性温度可大大减少引物和模板间的非特异性结合,提高PCR反应的特异性

tm是50%解链,那么退火要复性,必然不能只有一半的DNA复性,所以温度低一点,就能使引物充分与模板链结合了.

退火温度和Tm值有关,一般的说是在Tm值下5度,我用的话一般在Tm值下2-3度

网上复制粘贴的就算了吧,根本没明白到底问的是什么就抄了一堆,负点责任行么?回楼主:1、我不太明白你所说的“最高温度”是什么?是软件计算引物tm的结果?一般的计算结果都是刚好退火的温度,实验中一般采取比这个温度低5-10度

首先告诉你,Tm值没什么用的,你要注意的是退火温度,比如这是我做16S rDNA的程序,1)95度 10min(这个一般用94-95度,使DNA完全分开,这步一般固定)2)95度 30秒(94度、95度都可以,这步几乎也是固定的)3)退火温度 30-60秒

引物TM是设值和合成引物时的Tm值,也就是理论值.而PCR产物tm值是在实际操作中摸索出来的温度值 引物Tm值与PCR产物Tm值这两个不同的引物当然退火温度也不相同,一般在设计引物的时候,程序就会显示出Tm值是多少.在做PCR的时候,将退火温度设定的稍微低于Tm值一点,降低引物的特异性,可能会好点.当然,做PCR有一定的运气成分,同样的条件有时能扩出基因来,有时候却不能.一般来说,一直无法P出基因的话,首先就要检查引物设计是否有问题,如果没有问题,或者以前P出来过.那么检查下退火温度,多试几个温度.再就是Mg离子的浓度,模板不要太多.多尝试一下.总之,设定退火温度的时候略微比Tm低一点,适当的调整,多多尝试,就好了.

退火温度比引物Tm低5度只是建议温度,如果Tm不一致,最好按照高的那个,可以减少非特异性产物.或者可以试试不同的退火温度.建议先从50度开始

PCR包括3步,变性,退火,延伸.退火温度一般根据引物TM值确定

网站首页 | 网站地图
All rights reserved Powered by www.sgdd.net
copyright ©right 2010-2021。
内容来自网络,如有侵犯请联系客服。zhit325@qq.com