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pCr如何计算

测扩增前后的280 nm处的吸光度 由吸光度计算出核酸浓度

ct= -k lgx0+ b(线性方程)用这个方程可以通过ct值算出样品的起始浓度 斜率=-1/lg(1+e) 扩增效率e=1, 斜率=-3.32 扩增效率范围:90%-110% 斜率范围:-3.1和-3.59之间 △△ct这是相对荧光定量的一个计算公式的简化形式,用于比较不同样品

固定的反应试剂:比如buffer,dNTP,酶的用量一般都是固定的,按照protocol给出的要求加.关键是模板和引物的量.模板不能加太多,一般是50ul体系10-100ng左右,体积根据你DNA模板的浓度确定,比如你的DNA浓度是100ng/ul,你加1微升就够了.如果浓度太高,适当稀释一下.引物的浓度一般是终浓度0.2uM.把引物稀释成10uM的,加1微升到50ul体系里头.最后用水补齐到50ul.加的时候最好先加水,再加buffer,然后模板,引物,最后加酶.冰上操作.

引物设计软件都可以给出Tm,引物长度,碱基组成,引物使用缓冲的离子强度有关.长度为25mer以下的引物,Tm计算公式为:Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T) 对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为:Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) 600/size 公式中,Size = 引物长度.

1个双链DNA经过10次扩增后,变为2的10次方=1024个,其中带有部分母链的较长的DNA片段有2乘以10=20个,目的基因数=1024-20=1004个,选D

荧光定量pcr中,1个ct值代表2倍变化.所以你求出相对control的ct值变化x后,2指数x就是倍数变化的量.

比如荧光定量pcr可以估算dna量

DNA含量的计算公式为:DNA含量(mg/mL)=50?(260 nm的读数)?稀释倍数.公式中50的含义是:在标准厚度为1 cm的比色杯中,OD260为1相当于50 mg/mL的双链DNA,40 mg/mL的RNA,37 mg/mL的单链DNA以及30 mg/mL的寡核苷酸,因此若是测定RNA的含量,50应该换为40.从这里也能够看出,这个公式适用的前提是PCR是成功的.PCR是否成功,可用电泳来初步鉴定.

引物设计软件都可以给出Tm,引物长度,碱基组成,引物使用缓冲的离子强度有关.长度为25mer以下的引物,Tm计算公式为:Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为:Tm = 81.5 + 16.6 x Log10[Na+] + 0.41 (%GC) 600/size公式中,Size = 引物长度.

要得到确切的基因拷贝数,一定要做绝对定量,即用一系列已知拷贝数的标准品做标准曲线,然后根据CT值计算出样本的起始模板的拷贝数.y=klgX+bX=10^((CT-b)/k)得到起始模板拷贝数ps:样本的拷贝数要在标准曲线之内,如果超出了就要选能包含样本的标准品

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